质粒大量制备试剂盒
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货号:QR1016 规格:5 T/ 10T/ 20T
保存:常温保存,复检期1年。(注:RNaseA以附件形式发货,收到未使用前请-20℃保存)
试剂盒内容:
试剂盒组成
QR1016-5T
QR1016-10T
QR1016-20T
RNaseA
2mL
4mL
7mL
溶液Ⅰ
50mL
100mL
200mL
溶液Ⅱ
50mL
100mL
200mL
溶液Ⅲ
75mL
150mL
300mL
TE
5mL
10mL
20mL
说明书
1份
1份
1份
产品说明:
本试剂盒采用异丙醇沉淀法提取质粒DNA,简单易行,只需要常规离心机和几种简单的试剂,操作步骤较少。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等实验。
如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤(仅供参考):
1、取100-500 mL细菌培养物转入500 mL离心管中,4000 rpm离心10 min,尽量吸除上清。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 10 mL 溶液Ⅰ,使用旋涡振荡器或其他方法彻底悬浮细菌细胞沉淀,悬浮沉淀需均匀,不应留有小的菌块。注意:如果菌块未彻底混匀,会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入10 mL溶液Ⅱ,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:混匀一定要温和以免污染细菌基因组DNA,此时菌液应变得清亮粘稠,作用时间不要超过5 min,以免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入15 mL溶液Ⅲ,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮沉淀。
5、将上述液体在 -20 ℃放置30 min,4000 rpm离心20 min。
6、分别吸取上清液至新的离心管中,按1:100比例加入Rnase A,37 ℃孵育 39 min。
7、向离心管中加入等体积的异丙醇, -20 ℃沉淀60 min,4000 rpm离心20 min,弃上清。
8、加入70 %乙醇1 mL洗涤,4000 rpm 离心10 min,弃废液。
9、室温烘干质粒,加入1 mL经65℃水浴加热的洗脱液 TE,室温放置2 min,溶解质粒。
10、电泳检测质粒纯度,或者紫外分光光度计检测浓度。