其云质粒相关产品操作说明书

收到产品后，请先根据产品的具体货号，以及样品形态是干粉质粒或是甘油菌确定下一步是转化还是菌划线，并在下一步操作前查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。（请登录其云生物官网https://www.qiyunbio.com，查询具体质粒信息）

（一）干粉质粒

产品规格：2μg质粒干粉，请务必先转化进感受态，再挑单菌落抽提后再使用。

保质期限：90天。

保存温度：-20°C，置于-80°C保存时间更长。

运输方式：冰袋运输，1周内。

使用说明：

1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

2、取2μl质粒加至提前置于冰盒解冻的100μl感受态中，冰浴30min;

3、42°C热激90s，再冰浴2min;

4、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min;

5、6000rpm离心5min，仅留100μl上清混匀菌体沉淀；

6、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠或使用涂布棒，涂匀液体；

7、将平板正向培养1h，再倒置培养12h～16h;

8、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

注意：如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。

（二）甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）

产品规格：甘油菌种。

保质期限：90天。

保存温度：-80℃。

运输方式：冰袋运输，1周内。

注意事项：培养前请准确查找该菌种的抗性、抗性浓度和培养温度。

使用说明：

1、收到甘油菌种后请甩动保存管，让菌液不要吸附在管壁上；

2、用接种环在固体平板上四区划线，如有抗性就加对应抗性；

3、恒温培养箱倒置培养12~16h；

4、挑取单菌落接种于液体培养基中，如有抗性就加对应抗性；

5、摇床震荡培养12~16h，根据实验需要保存甘油菌，酵母加30% 甘油，其它一般加15%甘油。

注意：务必要四区划线挑单菌落培养。