Y1HGold 单杂互作验证试剂盒
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产品编号：QM6318-10T
产品组分：
组成
产品
产品名称
规格
成份一
培养基
SD-Ura with Agar
0.5 L×1
SD-Ura Broth
0.5 L×1
YPDA Medium Broth
0.5 L×1
SD-Leu with Agar
0.5 L×2
SD-Leu Broth
0.5 L×1
成份二
筛选剂
金担子素 A（AbA，1mg/mL）
1 mL
鉴定试剂盒
酵母基因组菌落 PCR 试剂盒
20 T
转化试剂盒
Super 酵母感受态制备与转化试剂盒 Plus
20 T
质粒
pGADT7 质粒
10 μg
pAbAi 质粒
10 μg
对照菌株
Y1HGold[p53-AbAi]菌株（备用）
0.2 mL
Y1HGold[p53-AbAi+pGADT7-p53]冻干粉
0.2 mL
Y1HGold[p53-AbAi+pGADT7-REC2]冻干粉
0.2 mL
成份三
感受态细胞
Y1HGold 感受态细胞
20×100 μL/支
注：
1）本试剂盒所提供的产品以其产品组成为依据。大致可用于 10 对单杂互作的验证，举例来说，即 1 个诱饵与 10 个转录因子（质粒不包含在内）。
2）需依据感受态的所需量来制备感受态，SK2402 中的试剂添加量能够按比例进行调整。
3）各个组分应当按照标签所标注的温度进行储存，感受态细胞务必在 - 80 ℃下保存。
4）“0.5 L×2” 表示：有 2 个包装，每个包装的容量为 0.5L；“5×1 mL” 表示：1 个包装，其中包含 5 个 1 mL 的量。
5）对照菌株的最优 AbA 浓度可参考网站上的菌株说明书。
6）感受态细胞 CC308 配备有 Carrier DNA 以及 PEG/LiAc。
7）载体序列，可在我司网站上进行下载。
产品简介
Y1HGold-GAL4-AbA 酵母单杂系统所使用的菌株 Y1HGold 属于 MATα 型，能够直接进行质粒转化以开展筛库试验其筛选标记为：ura3，leu2；报告基因是：AbAr。
Y1HGold-GAL4-AbA 酵母单杂系统需要 pAbAi 和 pGADT7 这两种质粒协同配套使用。质粒 pAbAi 的筛选标志是 URA，用于表达 pBait-AbAi construct（将 1 至 3 个 bait DNA 序列重复串联后克隆到 pAbAi 中）；质粒 pGADT7 的筛选标志为 LEU，用于表达 AD（GAL4 C 端 768 至 881 位氨基酸）与目标蛋白（Prey）的融合蛋白。GAL4-AbA 酵母单杂系统的原理如下：Aureobasidin A（AbA）是一种环酯肽抗生素，在低浓度（0.1 - 0.2μg/mL）时就能够对酵母产生毒性在基因组中整合了 pBait-AbAi 的酵母菌株（Bait-Reporter Yeast Strains），当猎物蛋白（Prey）结合到诱饵序列（Bait DNA）上时，GAL4 AD 就会激活 AbAr 的表达，进而使得菌株能够在含有抗生素 AbA 的培养基上生长。AbAr 相较于营养缺陷报告基因具有更低背景的优势，能够降低酵母单杂假阳性发生的几率。本方案在筛选诱饵酵母菌株的 AbA 最佳使用浓度以及进行互作验证时都采用了稀释点板的方法，相较于涂板方法，点板法能够更直观地展现出 DNA 和蛋白的互作情况，还能减少培养基和 AbA 的使用量。本方案中诱饵菌株鉴定运用了高保真酶，极大地减少了操作步骤，此外，本方案还对常见的酵母单杂结果进行了分析。
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