AbTaq DNA Polymerase 抗体法热启动Taq DNA 聚合酶

产品编号：QR1032

制品内容

AbTaq DNA Polymerase (5 U/μl)        100 μl

10× Taq Reaction Buffer                    3×1 ml

产品简介

AbTaq DNA Polymerase 是使用单克隆抗体修饰的热启动 Taq DNA Polymerase。在 55℃以下抗体可以有效封闭 DNA 聚合酶活性，高温下发生不可逆解离，使聚合酶恢复活性，从而有效避免低温下的非特异性扩增。本品主要用于荧光定量 PCR，尤其是 Taqman 探针法。

保存：冰袋运输，-20 °C保存，2年，避免反复冻融。

活性定义：

1个活性单位 (U) 定义为 74℃下，30 min 内催化 10 nmol dNTP 掺入酸不溶物所需的酶量。

质量控制：

核酸内切酶活性检测

将 5 U AbTaq DNA Polymerase 与 200 ng 超螺旋质粒 DNA 在 37℃下，共同温育 4 h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 10% 的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。

非特异性核酸酶活性检测

将 5 U AbTaq DNA Polymerase 与 15 ng 双 链 DNA 片段在 37℃ 温育 16 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测检测双链 DNA 底物无变化。

宿主 DNA 残留检测

使用大肠杆菌 16S rDNA 特异性引物探针组，采用荧光定量 PCR 法检测 5 U AbTaq DNA Polymerase，大肠杆菌宿主基因组 DNA 残留低于 1 copy。

使用方法：

1. 探针法荧光定量 PCR 反应体系

【注】: 使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

1. 引物推荐终浓度为 0.2 μM，效果不佳时可以在 0.1~1 μM 进行调整；引物长度请设定 18~25 bp，GC 含量为 40%~60%。最佳效率的扩增目标片段一般为 80~200 bp，设计时应尽量避免发夹结构、引物二聚体等。
2. 探针终浓度推荐为 0.25 μM，效果不佳时可以在 0.1~1 μM 进行调整。 c. 模板添加量不应超过总反应体系的 10%，推荐加样量为 1~2 μl。不同种类 DNA 模板中含有的靶基因拷贝数目不同，必要时可进行梯度稀释，以确定最佳的 DNA 模板添加量。

2. 探针法荧光定量 PCR 反应程序

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