pET28a-AtMg01410 Tagged ORF clone

产品内容

pET28a-AtMg01410 Tagged ORF Clone：2 μg

TE buffer：500 μl

产品信息

产品名称：pET28a-AtMg01410 Tagged ORF Clone

产品货号：PET28AtMg01410

产品类型：拟南芥基因Tagged ORF克隆

标签（Tag）: His

应用：蛋白表达与纯化

基因ID：AtMg01410

转录本：ATMG01410.1

别称：AtMg01410

载体：pET-28a(+)

抗性：kanR

ORF 长度：615 bp

蛋白长度：204

蛋白分子量：22814 Da

片段物种：拟南芥（Arabidopsis thaliana）

NCBI gene ID：

Uniprot ID：P92567

基因摘要

open reading frame 204

重组质粒ORF序列

>pET28a-AtMg01410 Tagged ORF Clone

CACAGCAGCGGCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCGCGGATCC

ATGTTTGGGGGGCGGAGAAGACGTCTCCCCCAAGATGGGACTTTTAACCAAACACAGCCTTTTGATCGACTGGTTGGCAGTAGGCACTCTTTCTCCTTTGACTTAAAGTCGGCCACTGATCGTTGGCCTTTAGTCTTTCTGTTTGAGGTGGTGCAGTACCTATTTGACCGCTCCTTTGCCTCAAGTGTGGTTAATTCTGCATTTGCATGCAATATCTTTGAGGTGCCTTTTGTTAAACTTAAACGAAGGTTCTCTCAAGTATGCTTTGTGGCAGGGCAGCCATTGGGATATCACGGTTCTTGGCCTACTTTCGCGCTATCACACCATATATTAGTGTGGTGGTGTGCGAAACAGGTGCATCCTGGTGTACGCTTTACATCGTACGCGGTACTCGGTGATGATGTTGTCATTGCCGATCAGGAAGTCGCCAAAGTCTATGAATCTGCTTTGGGTGGATTGGGGGTCAAAATAAGTTATCAAAAGTCCTTGATCCCCATTCAGGTTTTGCTGAGTTTGCTAAATGCTTCAGGGTTAGGGAATCTCGTATTAAAGAGAGAGATCTTTCCCCGAGAGTCAGGAGTTCTTTCCCTAATGTCAGTTCCTTCGCTAGCCTAG

GAATTCGAGCTCCGTCGACAAGCTTGCGGCCGCACTCGAGCACCACCACCACCACCACTGAGATCCGGCTGCTAAC

黑色：载体序列、红色：同源重组序列、绿色：酶切位点、蓝色：ORF序列

蛋白简介

Unknown

蛋白质序列

>Uncharacterized mitochondrial protein AtMg01410 (ORF204)

MFGGRRRRLPQDGTFNQTQPFDRLVGSRHSFSFDLKSATDRWPLVFLFEVVQYLFDRSFASSVVNSAFACNIFEVPFVKLKRRFSQVCFVAGQPLGYHGSWPTFALSHHILVWWCAKQVHPGVRFTSYAVLGDDVVIADQEVAKVYESALGGLGVKISYQKSLIPIQVLLSLLNASGLGNLVLKREIFPRESGVLSLMSVPSLA

关键词

Mitochondrion;Reference proteome

载体说明

pET-28a(+)是一种常用的大肠杆菌（E.coli）表达载体，广泛用于重组蛋白的高效表达。pET-28a(+) 凭借其高效表达、灵活标签系统和广泛兼容性，成为分子生物学和蛋白研究的经典工具载体。用户需根据实验需求选择是否保留标签或优化诱导条件。pET-28a(+) 的表达系统基于T7 启动子，需搭配表达T7 RNA 聚合酶的宿主菌（如 BL21(DE3)）以实现高水平蛋白表达；载体包含多克隆位点（MCS）（如 NcoI、BamHI、XhoI 等），便于外源基因插入，并带有N-端 His-Tag（6×His）以通过镍柱（Ni-NTA）纯化重组蛋白，同时提供T7 Tag和thrombin 切割位点以便于标签去除或检测，此外还携带卡那霉素抗性基因（Kan^R）用于阳性克隆筛选。pET-28a(+) 载体采用pBR322 来源的复制起点（ori），维持高拷贝数，并包含T7 转录/翻译元件：其T7 启动子严格依赖 T7 RNA 聚合酶驱动外源基因表达，同时受lac 操纵子调控（由lacI 阻遏蛋白抑制），可通过IPTG 诱导解除阻遏以启动蛋白表达，此外还配备核糖体结合位点（RBS）以优化翻译效率。pET-28a(+) 载体广泛应用于重组蛋白表达，能够高效生产可溶性蛋白或包涵体蛋白；其N-端 His-Tag可通过镍柱（Ni-NTA）进行亲和纯化，快速获得高纯度蛋白，适用于蛋白功能研究，包括酶活性分析、抗体生产及结构生物学研究等。pET-28a(+) 载体需选用DE3 溶原菌（如 BL21(DE3)、Rosetta(DE3)）作为宿主菌，以提供 T7 RNA 聚合酶进行蛋白表达，通常采用0.1–1 mM IPTG进行诱导，但需优化诱导浓度和时间以降低包涵体形成风险；此外，载体携带的 His-Tag 虽便于纯化，但可能影响蛋白功能，可通过凝血酶或TEV 蛋白酶切除标签以满足实验需求。

使用说明

1、以5000 × g离心5 min；

2、打开冻存管，加入20 μL无菌水溶解DNA，并在室温下孵育10 min；

3、短暂涡旋冻存管，然后瞬时离心 (小于5000 × g)。

4、质粒溶液在-20℃下可稳定保存一年，请避免反复冻融。

扩增方案

1、收到质粒干粉后请先5000 rpm离心1 min，再加入20 μL无菌水溶解质粒，室温放置1 min；

2、从-80 °C冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

3、取2 μL质粒加至100 μL感受态中，冰浴30min;

4、42 °C热激90 s，再冰浴2 min;

5、加入900 μL无抗的LB液体培养基，200 rpm震荡培养45 min;

6、5000 rpm离心5 min，仅留100 μL上清混匀菌体沉淀；

7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

8、将平板正向培养1 h，再倒置培养12 h～16 h;

9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12 h~16 h，根据实验需要提取质粒。

实验流程示例

1、转化：将本产品质粒转入 BL21(DE3) 感受态细胞；

2、诱导：IPTG 诱导表达；

3、纯化：Ni-NTA 柱纯化，SDS-PAGE 或 Western Blot 验证。

注意事项

1、同一个基因的单个转录序列可能由于发生自然变异 (例如核苷酸多态性)而有所不同，每一种都有其自身有效的存在。

2、该克隆被工程化，但表达取决于基因的性质。

3、本产品仅限于科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Tair 网站：https://www.arabidopsis.org/servlets/Search?type=general&search_action=detail&method=1&show_obsolete=F&name=AtMg01410&sub_type=gene&SEARCH_EXACT=4&SEARCH_CONTAINS=1
NCBI网站：

Uniprot 网站：https://www.uniprot.org/uniprotkb/P92567/entry

相关文献 (NCBI PubMed ID)

PMID: 8988169

重组质粒图谱