1.1×TE/醋酸锂溶液

制品内容

产品简介

1.1×TE/LiAc Solution是用于制备酿酒酵母感受态细胞的缓冲液体系。其中TE组分作为缓冲液维持pH稳定，LiAc则诱导酵母细胞进入短暂感受态，使其具备外源DNA摄取能力。

保存

4℃，保存两年。

使用方法

一、感受态制作方法
1）酵母菌种在YPDA平板上划线，挑新鲜单菌落到3ml YPDA（50ml离心管）中30℃、250rpm摇菌12h，取50ul转接至50ml YPDA（250ml三角瓶）中，250rpm摇菌至OD600约0.15-0.3。
2）室温700g离心5min收集菌体，弃上清，用100ml YPDA重悬，30℃、250rpm摇菌至OD600=0.4-0.5。
3）室温700g离心5min收集菌体，弃上清，用50ml无菌ddH2O重悬，700g离心5min弃上清。
4）用15ml预冷1.1×TE/LiAc重悬菌体，1500g离心30s弃上清，0.6ml 1.1×TE/LiAc重悬，可直接转化或分装10管（冰浴保存≤3h）。

二、感受态转化方法
1）Carrier DNA预处理：每次使用前需95℃水浴/金属浴变性3 min，立即冰浴3 min；重复一次，最后冰浴≥3 min。

2）按体系配制转化混合液：

吸打混匀，30℃水浴孵育（文库45 min，普通30 min），期间每隔15 min（文库）或10 min（普通）翻转混匀6-8次。

3）加入DMSO：文库体系加160 μl，普通体系加20 μl。
4）42℃热激（文库20 min，普通15 min），期间每隔10 min（文库）或7.5 min（普通）翻转混匀6-8次。
5）4000 rpm离心40 s弃上清，用2×YPDA或YPD Plus重悬（文库3 ml，普通1 ml）。
30℃、200 rpm复苏培养1.5 h，离心30 s弃上清。
0.9% NaCl重悬（文库5-15 ml，普通0.05-1 ml），涂板，30℃培养48-120 h。

产品组分与配方

注意事项

1）可根据实验需求按比例调整1.1×TE/LiAc Solution的用量，但该方法制备的酵母感受态细胞不可-80℃保存。
2）4℃保存，有效期2年；若发现污染（如浑浊、沉淀等），应立即停止使用。

>>>> 说明书下载