SGR/-Trp/+X-gal Broth
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制品内容
货号
名称
规格
QM4425-0.5L
SGR/-Trp/+X-gal Broth
0.5L
QM4425-2.5L
SGR/-Trp/+X-gal Broth
2.5L
产品简介
X-gal（X-β-gal）是β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）的特异性显色底物，其化学名称为5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷（5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside）。该试剂广泛应用于大肠杆菌蓝白斑筛选及酵母单/双杂交系统的X-Gal显色检测。由于葡萄糖会抑制β-半乳糖苷酶的表达，因此不能作为lacZ基因显色反应的碳源。SGR/-Trp/+X-gal Broth是以半乳糖和棉子糖为碳源并添加X-gal显色底物的固体培养基，专门用于酵母单/双杂交系统中LacZ报告基因的检测。当蛋白互作发生时，lacZ报告基因表达产生β-半乳糖苷酶，该酶可水解X-gal生成半乳糖和深蓝色的5-溴-4-氯靛蓝，使阳性菌落呈现蓝色。此外，SGR/-Trp/+X-gal培养基还可用于Y187/pGBKT7系统中转录因子自激活活性的检测分析。
产品组分与配方
产品组分
QM4425-0.5L
QM4425-2.5L
含量/100mL
保存条件
SC/–Trp Broth
0.5L
2.5L
0.74 g
室温干燥
20%半乳糖溶液（过滤除菌）
50 ml
250 mL
10 mL
室温干燥
20%棉子糖溶液（过滤除菌）
25 mL
125 mL
5 mL
室温干燥
10X BU Salts
50 mL
250 mL
10 mL
4℃
X-gal 溶液（20 mg/ml，过滤除菌）
1 mL×2
5 mL×2
0.4 mL
-20℃
使用方法
一、SGR/–Trp/+X-gal显色板制备：
SC/–Trp Broth培养基按0.74g/100ml比例溶解于水，加入2g琼脂粉（凝集度>1200）充分混匀，121℃高压灭菌15分钟，待温度降至60℃以下后依次加入适量半乳糖溶液、棉子糖溶液、10X BU Salts和X-gal溶液，混匀后倒平板。制备好的平板可4℃避光保存（最长保存期两个月）。注意：由于半乳糖、棉子糖和10X BU Salts添加量较大，建议在添加前55℃预热，避免倒板过程中培养基凝固。
二、SGR/–Trp/+X-gal Broth平板操作步骤
1）将构建好的重组质粒转化至酵母感受态细胞，涂布于筛选平板SD/–Trp
2）待筛选平板长出菌落后，挑取单菌落转接至显色平板SGR/–Trp/+X-gal
3）30℃培养72小时观察显色结果注意事项
不开封的各组分可保存1年，开封后若发现染菌，停止使用。
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