EB缓冲液（除菌）—猪链球菌感受态制备试剂

制品内容

产品简介

EB缓冲液（Ethidium Bromide Buffer）是一款专为猪链球菌感受态细胞制备优化的无菌型试剂，适用于分子生物学实验中细菌转化前的细胞处理。本产品通过除菌过滤工艺（0.22μm滤膜）确保无菌性，避免实验污染，适用于敏感的细胞操作流程

保存

2-8℃避光储存，保质期18个月。

使用方法

感受态细胞的制备流程：
1）挑取猪链球菌2型SC-19单菌落，接种于10mL含5%牛血清的TSB培养基中，37℃摇床培养至对数生长期（过夜）。
2）将上述培养物按1:100的比例转接至新鲜TSB培养基，37℃振荡培养2-3小时，待菌液处于对数生长期（OD₆₀₀值约为0.3-0.5）时停止培养。
3）取菌液6000rmp/min离心1分钟，弃去上清液（操作体积以100mL菌液为例）。
4）向沉淀中加入10mL CTB缓冲液轻轻重悬菌体，混匀后4℃、6000rmp/min离心1分钟，弃去上清液；重复用10mL CTB缓冲液重悬菌体，随后置于冰浴中30分钟。
5）4℃、6000rmp/min离心1分钟后弃去上清液，用10mL EB（或EBS）缓冲液洗涤菌体两次，每次离心后均弃上清。
6）最后离心弃上清，加入500μL含15%甘油的EB缓冲液（即EB甘油缓冲液）重悬菌体沉淀，按100μL/管分装保存。

二）转化实验步骤：
1）取100μL上述制备的感受态细胞，加入待转化的质粒溶液，充分混匀后转移至电转杯中，进行电转化操作。
2）电转化完成后，立即向电转杯中加入500μL已在37℃预热的含胎牛血清的TSB培养基，将菌液转移至试管中，37℃摇床振荡孵育2小时。
3）将孵育后的菌液均匀涂布于含相应抗生素的TSA筛选平板上，28℃倒置培养24-32小时，最终获得含穿梭质粒的链球菌单菌落。

注意事项

1）本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断或治疗。
2）操作时需穿戴防护装备，避免直接接触CTB成分。
3）若需重复使用，建议分装后冷冻保存，避免反复冻融。