T5 Exonuclease T5核酸外切酶

制品编号与规格

产品简介

核酸外切酶（exonucleautomotive service engineers）在核酸水解酶中，是具有从分子链的末端顺次水解磷酸二酯键而生成单核苷酸作用的酶。总对单一核苷酸链作用，在剪切修饰反应中起作用，与核酸内切酶相对应。

T5 Exonuclease（T5核酸外切酶）是核酸外切酶的一种，它能沿5′→3′方向降解DNA。该酶既能从5′末端起始消化，也能从线性或环状双链DNA的切刻或缺口处起始消化，但不能降解超螺旋双链DNA。T5核酸外切酶还具有单链DNA核酸内切酶活性。

T5核酸外切酶从含T5噬菌体D15基因质粒的E.coli菌株中纯化得到，常被用于消化DNA和基因克隆上，还可应用于 Gibson 组装方法。

贮存溶液

50 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% glycerol, 0.1% Triton X-100（pH 7.5；25℃）

保存及保质期： -20 °C，12个月

活性单位定义

在50 μl 反应体系中，37℃条件下 ，30 min内能从双链 DNA 底物上催化产生 1 nmol 的酸可溶性脱氧核糖核苷酸所需要的酶量定义为1 个酶活单位（U）。

表达宿主

纯化自表达 T5 噬菌体 D15 基因质粒的E.coli菌株。

酶切位点

T5 Exonuclease（T5核酸外切酶）是核酸外切酶的一种，它能沿5′→3′方向降解DNA。

该酶既能从5′末端起始消化，也能从线性或环状双链DNA的切刻或缺口处起始消化，但不能降解超螺旋双链DNA。

T5核酸外切酶还具有单链DNA核酸内切酶活性。

用途

1. 常用于Gibson组装；降解线性单链、双链DNA或缺刻质粒DNA;

2. 从连接的环状双链DNA中去除不完全连接产物;

3. 降解线性和缺刻质粒DNA，以获得高纯度的超螺旋质粒DNA;

4. 除去碱裂法提取质粒过程中产生的变性质粒DNA；提高小量抽提质粒cDNA文库的转染效率。

推荐连接反应体系 (Total 50 µl)

将反应后的连接反应液充分混匀并瞬离，37 ℃温育 30 min，反应结束后立即冰浴并加入EDTA至终浓度为11mM以终止反应。

注意事项

1. 添加酶切反应液时，应在冰上进行，T5核酸外切酶应最后加入反应体系中，并且加入前须注意混匀反应体系；酶在使用完后应立即放入-20 °C保存；

2. T5核酸外切酶是一种对于DNA底物有选择性的核酸外切酶，其对不同的DNA底物显示出不同的反应活性。因此，消化特定的底物时，须注意适当控制好酶量和反应时间；

3. T5核酸外切酶的最佳反应温度为37℃，但是在50℃也具有一定活性，因此可用于Gibson组装。

4. T5核酸外切酶在普通PCR buffer中也具有活性。

5. 本产品仅限于专业人员的科学研究使用。