Taq DNA Ligase Taq DNA连接酶

制品编号与规格

产品简介

Taq DNA Ligase 是一种耐高温连接酶，它能催化与同一互补靶 DNA 链杂交的两条相邻寡核苷酸链的 5´-磷酸和 3´-羟基之间形成磷酸二酯键。该催化反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对，且两条寡核苷酸链之间没有间隙的条件下才会发生。因此，可以用它来检测单碱基替换。Taq DNA 连接酶以 NAD+为辅酶因子，在 45℃-65℃范围内均有活性。

保存及保质期：-20 °C，12个月

活性单位定义

在50 μL 反应体系中，45 ℃条件下温育 15 min内能使 50% 的 1 μg经 BstEII 消化的 λDNA 片段发生连接所需要的酶量定义为 1 个活性单位（U）。

表达宿主

重组 E. coli 菌株，含有从 Thermus aquaticus HB8 中克隆的连接酶基因。

质量控制

非特异性 DNA 酶污染：在反应体系中加入 DNA 底物，孵育 16 h，经琼脂糖凝胶电泳检测无显著 DNA 降解现象。

切口酶残留检测：将适量本产品和超螺旋DNA底物，37℃下孵育 4 h，DNA 的电泳谱带无变化。

核酸外切酶残留检测：将适量本产品和双链DNA，37℃下孵育 4 h，DNA 的电泳谱带无变化。

用途

同源重组；

用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测；

通过 PCR 扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变。

使用方法

1）推荐连接反应体系 (Total 50 μL)

2）反应条件：45℃温育 15 min。

3）反应终止：加入终止染液（50%甘油，50 mM EDTA 和溴酚兰）终止反应。

注意事项

1. 添加连接反应液时，应在冰上进行，Taq DNA Ligase 应最后加入反应体系中，并且加入前须注意混匀反应体系；酶在使用完后应立即放入-20 °C保存；

2. 10×Taq DNA Ligase Buffer 中含有辅酶因子 NAD+，为了延长 NAD+的半衰期，Buffer 应于-80℃储存；

3. Taq DNA Ligase 不能替代 T4 DNA ligase；

4. 本产品仅限于专业人员的科学研究使用。